产品货号：
M20079
中文名称：
反转录酶(缺失RNase H)
英文名称：
Reverse Transcriptase, RNase H-
产品规格：
10kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是通过基因重组技术克隆表达M-MuLV的突变型的反转录酶。本酶的RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成，高比例的全长cDNA文库的构建以及Real-Time RT-PCR反应等。
以Poly(rA)·Oligo(dT)为模板/引物，37℃反应10min，掺入1nmol的[3H] dTTP所需的酶量定义为1个活性单位。
| 组分 | 规格 |
| Reverse Transcriptase(RNase H-,200U/μL) | 50μL |
| 5×RT Buffer | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
- 用DEPC处理实验用到的所有实验器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
- 确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
- 纯化过的RNA必须保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，以上成分会干扰第链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 为保证反转录反应的有效进行，需使用高质量的RNA模板。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴次性手套操作。
cDNA第一链合成反应体系：
- 试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
- 按顺序加入以下反应物：
成分 用量 模板 总RNA 0.1ng～5μg poly(A) mRNA 10pg 特异性RNA 0.01pg 引物 Oligo (dT)18 1μL Random N6 1μL 基因特异性引物 15～20pmol 5×RT Buffer 4μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL dNTPs(10mM) 2μL Reverse Transcriptase(200U/μL) 1μL RNase-Free Water 至20μL - 如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase-Free Water混匀后，65℃孵育5min，冰上冷却，再加入其它成分。
- 轻轻混匀，离心。42℃孵育15～30min。如果RNA模板中不含poly A结构，25℃先孵育5min，随后42℃孵育15～30min。
- 有实验结果提示，本反转录酶可在15min内完成1kb反转录反应。
- 反应产物可直接用于PCR，如果不立即使用，-20℃保存少于一周，长时间保存建议-70℃放置。
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